LABORATOIRE (partie 2/4)

## Objectifs et prérequis **Objectifs** : À la fin de ce chapitre, l’élève sera capable de : 1. Intégrer les connaissances acquises en laboratoire dans des situations professionnelles concrètes (contrôle de qualité, analyse de prélèvements biologiques). 2. Mettre en œuvre des activités de remédiation pour corriger les écarts observés lors des essais et garantir la conformité des résultats aux normes camerounaises (MINSANTE, OMS). 3. Utiliser correctement un spectrophotomètre UV‑Vis, un photomètre de flamme et un ionomètre : réglage, étalonnage, mesure, interprétation des données et entretien de base. 4. Appliquer les règles de sécurité, d’hygiène et de traçabilité propres aux analyses médicales en milieu hospitalier ou de laboratoire de recherche au Cameroun. **Prérequis** : - Notions de base en chimie analytique (solutions, concentration, pH, absorbance). - Connaissance des unités du Système International (mol·L⁻¹, nm, µg·mL⁻¹). - Maîtrise des bonnes pratiques de laboratoire (BPL) : port des EPI, manipulation des produits dangereux, nettoyage du poste de travail. - Familiarité avec le matériel de mesure de base (pipettes, burettes, balances analytiques). --- ## Introduction contextualisée Dans le système de santé camerounais, les laboratoires d’analyses médicales jouent un rôle central dans le diagnostic, le suivi thérapeutique et la surveillance épidémiologique (paludisme, VIH, tuberculose, maladies non transmissibles). Les techniciens de laboratoire doivent donc être aptes à réaliser des analyses fiables, rapides et conformes aux référentiels nationaux (Arrêté n° 001/MINSANTE du 12 janvier 2022 relatif aux bonnes pratiques d’analyse médicale). Ce chapitre s’inscrit dans la continuité de la première partie du module « Laboratoire », où l’élève a étudié l’organisation du poste de travail, la préparation des réactifs et les techniques de séparation. Nous abordons maintenant deux volets pédagogiques essentiels : 1. **Les activités d’intégration** qui permettent de mettre en pratique les acquis théoriques dans des scénarios réels (contrôle de qualité d’un réactif, validation d’une méthode). 2. **Les activités de remédiation** visant à identifier et corriger les sources d’erreur (instrumental, opérateur, environnement) afin d’assurer la traçabilité et la reproductibilité des résultats. 3. **La leçon 13** consacrée aux appareils de mesure spectrophotometriques et ionométriques, outils indispensables pour le dosage des constituants sanguins, urinaires ou de milieux de culture. --- ## I. Activités d’intégration ### A. Mise en situation professionnelle **Scénario** : Un laboratoire de biologie médicale de Yaoundé reçoit un lot de réactifs pour le dosage de la créatinine sérique. Le technicien doit vérifier la conformité du réactif avant son utilisation en routine. ### B. Étapes de l’intégration | Étape | Action | Résultat attendu | Référence normativa | |-------|--------|------------------|---------------------| | 1 | Réception du lot : vérification de l’étiquetage (nom, concentration, date de péremption, numéro de lot). | Conformité de l’identification. | Arrêté n°001/MINSANTE du 12 janvier 2022, art. 4.2 | | 2 | Contrôle visuel : absence de précipité, couleur conforme au nuancier du fabricant. | Aspect homogène. | Guide BPL, § 3.1 | | 3 | Préparation d’une solution témoin à concentration connue (ex. 100 µg·mL⁻¹ de créatinine). | Solution prête pour l’étalonnage. | Procédure interne SOP‑CRE‑01 | | 4 | Mesure de l’absorbance à 505 nm (longueur d’onde spécifique du complexe créatinine‑picrate) avec le spectrophotomètre. | Valeur d’absorbance mesurée. | Norme ISO 15189:2012, chap. 5.5 | | 5 | Calcul de la concentration réelle à partir de la courbe d’étalonnage (voir § II.B). | Écart ≤ 5 % par rapport à la valeur nominale. | Acceptation selon SOP‑CRE‑01 | | 6 | Décision : libération du lot si conforme, sinon mise en quarantaine et retour au fournisseur. | Traçabilité de la décision. | Registre de contrôle qualité (RCQ) | ### C. Points de contrôle critiques (PCC) - **PCC1** : Vérification de la date de péremption avant toute manipulation. - **PCC2** : Utilisation de pipettes calibrées (vérification mensuelle par pesée). - **PCC3** : Réalisation du blanc (solvant seul) pour éliminer l’absorbance de fond. > **>** Toute déviation supérieure à 5 % entre la concentration mesurée et la valeur nominale entraîne le rejet du lot conformément à la procédure SOP‑CRE‑01. ### D. Exemple d’application (calcul) Supposons que l’étalonnage ait donné la relation linéaire suivante (obtenue par moindres carrés) : \[ A = 0,012\,C + 0,002 \] où \(A\) est l’absorbance (sans unité) et \(C\) la concentration en µg·mL⁻¹. Une mesure sur l’échantillon donne \(A = 0,146\). \[ C = \frac{A - 0,002}{0,012} = \frac{0,146 - 0,002}{0,012}= \frac{0,144}{0,012}=12,0\;\text{µg·mL}^{-1} \] Si la concentration nominale du témoin était 12,5 µg·mL⁻¹, l’erreur relative est \[ \varepsilon = \frac{|12,0-12,5|}{12,5}\times100 = 4\% \] Comme \(\varepsilon < 5 %\), le lot est accepté. --- ## II. Activités de remédiation ### A. Objectif de la remédiation Identifier les causes d’écarts (instrumentaux, opératoires, environnementaux) et mettre en place des actions correctives afin de rétablir la conformité du procédé analytique. ### B. Démarche de remédiation (PDCA) 1. **Plan** : Définir le problème (ex. absorbance trop élevée lors du contrôle de qualité). 2. **Do** : Mettre en œuvre les actions de contrôle (vérification du blanc, contrôle de la lampe, nettoyage de la cuve). 3. **Check** : Analyser les résultats après intervention (comparaison avec les limites d’acceptation). 4. **Act** : Standardiser la solution efficace (mise à jour de la SOP, formation du personnel). ### C. Sources d’erreur fréquentes et actions correctives | Source d’erreur | Symptôme | Action corrective | Fréquence de contrôle | |-----------------|----------|-------------------|-----------------------| | Lampe défaillante (spectrophotomètre) | Bruit de fond augmenté, drift de l’absorbance | Remplacer la lampe, réaliser un warm‑up de 30 min | Mensuel | | Cuve sale ou rayée | Absorbance irréproducible, valeurs systématiquement hautes | Nettoyer à l’acide nitrique 10 % puis rincer à l’eau distillée ; vérifier l’état optique | Après chaque série de 20 mesures | | Mauvaise préparation du blanc | Absorbance de fond non nulle | Préparer le blanc avec le même solvant que l’échantillon, filtrer si nécessaire | Avant chaque étalonnage | | Variation de température du réactif | Déviation de la pente de la courbe d’étalonnage | Maintenir le réactif à 20 ± 2 °C (bain thermostaté) | Continu | | Erreur de pipetage (volume) | Écarts linéaires sur toute la gamme | Vérifier la calibration des pipettes par méthode gravimétrique ; former le personnel | Trimestriel | > **>** Toute mesure présentant un écart supérieur à 2 × l’écart‑type du blanc doit déclencher une vérification immédiate de la lampe et de la cuve. ### D. Exemple de remédiation Lors d’un contrôle de qualité du dosage de l’urée, l’absorbance moyenne du blanc est passée de 0,005 à 0,020. - **Analyse** : La hausse suggère une contamination de la cuve par des résidus de protéine. - **Action** : Trempage de la cuve dans une solution d’enzymatique (pepsine 0,5 % pH 2,0) pendant 15 min, rinçage à l’eau distillée, séchage à l’air. - **Vérification** : Nouveau blanc mesuré à 0,006, conforme à la spécification (< 0,010). - **Standardisation** : Ajout d’une étape de nettoyage enzymatique hebdomadaire dans la SOP‑URÉE‑02. --- ## III. Leçon 13 : Spectrophotomètre/Photomètre de flamme, Ionomètre ### A. Spectrophotomètre UV‑Vis #### 1. Principe de fonctionnement Le spectrophotomètre mesure l’absorbance \(A\) d’une solution selon la loi de Beer‑Lambert : \[ A = \varepsilon \, b \, C \] où \(\varepsilon\) est le coefficient d’absorptivité molaire (L·mol⁻¹·cm⁻¹), \(b\) la longueur du trajet optique (cm) et \(C\) la concentration (mol·L⁻¹). #### 2. Composants principaux - Source de lumière (lampe tungstène pour le visible, lampe deutérium pour l’UV). - Monochromateur (réseau de diffraction) permettant de sélectionner une longueur d’onde précise (200‑800 nm). - Cuvette (quartz pour UV, verre ou plastique pour visible). - Détecteur (photodiode ou photomultiplicateur). - Système d’acquisition et de traitement du signal. #### 3. Étalonnage et utilisation 1. **Mise sous tension** et warm‑up de 15 min (lampe stabilisée). 2. **Sélection de la longueur d’onde** adaptée à l’analyte (ex. 540 nm pour l’hémoglobine). 3. **Mesure du blanc** (solvant seul) → mise à zéro de l’appareil. 4. **Préparation des étalons** (série de concentrations connues). 5. **Mesure de l’absorbance** de chaque étalon → tracé de la courbe d’étalonnage. 6. **Mesure de l’échantillon** → lecture de l’absorbance → détermination de la concentration via la courbe ou l’équation de régression. #### 4. Exemple chiffré : dosage de l’hémoglobine par la méthode cyanéméthemoglobine - Réactif : solution de cyanure de potassium + phosphate tampon pH 7,5. - Longueur d’onde : 540 nm. - Étalonnage : concentrations de 0, 5, 10, 15, 20 g·dL⁻¹ donnent respectivement des absorbances 0,000 ; 0,120 ; 0,240 ; 0,360 ; 0,480. - Équation de régression : \(A = 0,024\,C\) (C en g·dL⁻¹). - Échantillon patient : \(A_{mes}=0,300\). - Concentration : \(C = \frac{0,300}{0,024}=12,5\;g·dL^{-1}\). > **>** La méthode cyanéméthemoglobine est reconnue par l’OMS comme référence internationale pour le dosage de l’hémoglobine (OMS/IBCT, 2011). #### 5. Sécurité et entretien - Porter des lunettes de protection et des gants nitrile lors de la manipulation des réactifs contenant du cyanure. - Nettoyer les cuvettes immédiatement après usage avec de l’eau distillée puis de l’éthanol 70 % pour éviter les dépôts. - Vérifier l’intensité de la lampe chaque mois ; remplacer si la dérive dépasse 2 % de l’absorbance du blanc. ### B. Photomètre de flamme #### 1. Principe Le photomètre de flamme mesure l’intensité de l’émission lumineuse d’un élément métallique lorsqu’il est introduit dans une flamme air‑acétylène ou air‑propane. L’intensité émise est proportionnelle à la concentration de l’élément dans l’échantillon (loi d’émission). #### 2. Éléments typiquement analysés au laboratoire médical - Sodium (Na⁺) – émission à 589 nm. - Potassium (K⁺) – émission à 766 nm. - Calcium (Ca²⁺) – émission à 422 nm (souvent mesuré par absorption atomique, mais le photomètre de flamme peut être utilisé pour des plages élevées). #### 3. Procédure d’analyse 1. **Préparation de la solution** : dilution de l’échantillon sanguin ou urinaire dans une solution d’acide nitrique 0,1 % pour éviter la précipitation. 2. **Allumage de la flamme** : réglage du débit d’air et de gaz pour obtenir une flamme bleue stable (température ≈ 2100 K). 3. **Étalonnage** : préparation d’étalons de Na⁺ et K⁺ (ex. 0, 2, 4, 6, 8 mmol·L⁻¹). Mesure de l’intensité pour chaque étalon → tracé de la courbe. 4. **Mesure de l’échantillon** : aspiration du liquide dans la flamme, lecture de l’intensité → détermination de la concentration via la courbe. 5. **Nettoyage** : rinçage du système d’aspiration avec de l’eau distillée entre chaque échantillon pour éviter la contamination croisée. #### 4. Exemple de dosage du potassium sérique - Étalonnage : intensités (unités arbitraires) : 0 mmol·L⁻¹ → 0 ; 2 mmol·L⁻¹ → 115 ; 4 mmol·L⁻¹ → 230 ; 6 mmol·L⁻¹ → 345 ; 8 mmol·L⁻¹ → 460. - Équation : \(I = 57,5\,C\) (C en mmol·L⁻¹). - Échantillon patient : intensité mesurée \(I_{mes}=275\). - Concentration : \(C = \frac{275}{57,5}=4,78\; \text{mmol·L}^{-1}\). > **>** La flamme doit être exempte de particules ; toute présence de suie indique un mauvais mélange air‑gaz et nécessite un réglage immédiat. #### 5. Sécurité - Utiliser un détecteur de flamme et une évacuation adéquate (hotte) pour éviter l’inhalation de produits de combustion. - Vérifier l’étanchéité des raccords de gaz avant chaque utilisation. - Porter un tablier anti‑feu et des lunettes de protection. ### C. Ionomètre (électromètre d’ions) #### 1. Principe L’ionomètre mesure le potentiel électrique d’une électrode sélective d’ion (ISE) plongée dans une solution. Le potentiel varie selon l’activité de l’ion cible suivant l’équation de Nernst : \[ E = E^{0} + \frac{RT}{zF}\ln a_{ion} \] où \(E^{0}\) est le potentiel standard, \(R\) la constante des gaz parfaits, \(T\) la température absolue (K), \(z\) la charge de l’ion, \(F\) la constante de Faraday, et \(a_{ion}\) l’activité de l’ion. #### 2. Électrodes sélectives couramment utilisées en laboratoire médical - Électrode à verre pour H⁺ (pH‑mètre). - Électrode à membrane PVC pour K⁺, Na⁺, Cl⁻, Ca²⁺. - Électrode à solide pour NH₄⁺, NO₃⁻. #### 3. Étalonnage de l’ionomètre 1. **Préparation de deux tampons** : un tampon faible activité (ex. 0,1 mmol·L⁻¹) et un tampon forte activité (ex. 100 mmol·L⁻¹) de l’ion cible. 2. **Mesure du potentiel** dans chaque tampon → obtention de deux points (E₁, E₂). 3. **Calcul de la pente** : \[ \text{pente} = \frac{E_{2}-E_{1}}{\log_{10}(a_{2})- \log_{10}(a_{1})} \] La pente théorique à 25 °C pour un ion monovalent est de 59,16 mV·dec⁻¹. Un écart supérieur à ± 3 mV·dec⁻¹ indique un dysfonctionnement de l’électrode. 4. **Vérification du point zéro** : mesure dans une solution d’activité nulle (solution de référence) pour obtenir \(E^{0}\). #### 4. Exemple de mesure du sodium sérique - Tampon faible : 0,1 mmol·L⁻¹ → \(E_{1}= -120,5\) mV. - Tampon fort : 100 mmol·L⁻¹ → \(E_{2}= +30,2\) mV. - Pente calculée : \[ \frac{30,2 - (-120,5)}{\log_{10}(100)-\log_{10}(0,1)} = \frac{150,7}{2 - (-1)} = \frac{150,7}{3}=50,2\; \text{mV·dec}^{-1} \] La pente obtenue (50,2 mV·dec⁻¹) est inférieure à la valeur théorique (59,2 mV·dec⁻¹) → indication d’une usure de la membrane; l’électrode doit être régénérée ou remplacée. - Après régénération, nouvelle mesure donne pente = 58,9 mV·dec⁻¹ (acceptable). - Mesure du sérum patient : potentiel \(E_{mes}= -3,0\) mV. - En utilisant l’équation de Nernst linéarisée : \[ \log a_{Na^+}= \frac{E_{mes}-E^{0}}{\text{pente}} \] en supposant \(E^{0}= -120,5\) mV (potentiel du tampon faible) : \[ \log a_{Na^+}= \frac{-3,0 - (-120,5)}{58,9}= \frac{117,5}{58,9}=1,996 \] \[ a_{Na^+}=10^{1,996}=99,2\; \text{mmol·L}^{-1} \] - En supposant un coefficient d’activité \(\gamma = 0,7\) pour le sérum, la concentration réelle est \[ C = \frac{a}{\gamma}= \frac{99,2}{0,7}\approx 141,7\; \text{mmol·L}^{-1} \] cohérente avec l’intervalle de référence natrémique (135‑145 mmol·L⁻¹). > **>** L’entretien régulier des électrodes à membrane (rincage à l’eau distillée, stockage dans une solution de remplissage recommandée par le fabricant) prolonge leur durée de vie au-delà de 6 mois. #### 5. Sécurité et bonnes pratiques - Éviter les chocs mécaniques sur l’électrode fragile (verre ou membrane). - Ne jamais laisser l’électrode sécher ; la conserver toujours dans sa solution de remplissage. - Vérifier la température de la mesure ; compenser si nécessaire (la plupart des ionomètres modernes intègrent une compensation automatique de température). --- ## Synthèse du chapitre - **Activités d’intégration** : mise en situation de contrôle de qualité d’un réactif, vérification de l’étiquetage, aspect visuel, préparation d’un témoin, mesure spectrophotometrique, calcul de concentration, décision de libération ou de mise en quarantaine. - **Activités de remédiation** : démarche PDCA, identification des sources d’erreur (lampe, cuve, blanc, température, pipetage), actions correctives spécifiques, suivi périodique. - **Spectrophotomètre UV‑Vis** : loi de Beer‑Lambert, composants, étalonnage à longueur d’onde précise, exemple de dosage de l’hémoglobine (méthode cyanéméthemoglobine), entretien et sécurité. - **Photomètre de flamme** : principe d’émission, éléments analysés (Na⁺, K⁺, Ca²⁺), procédure d’étalonnage et de mesure, exemple de dosage du potassium sérique, précautions de flamme et de sécurité. - **Ionomètre** : principe de Nernst, électrodes sélectives, étalonnage à deux points, calcul de pente et de potentiel, exemple de mesure du sodium sérique, entretien des électrodes et consignes de sécurité. --- ## Glossaire | Terme | Définition | |-------|------------| | Absorbance (A) | Mesure logarithmique du rapport entre l’intensité de la lumière incidente et celle transmise à travers un échantillon. | | Beer‑Lambert | Loi liant l’absorbance à la concentration, au coefficient d’absorptivité et à la longueur du trajet optique. | | Cuvette | récipient transparent (quartz, verre ou plastique) contenant la solution à analyser dans un spectrophotomètre. | | Flamme air‑acétylène | source de chaleur utilisée en photométrie de flamme pour exciter les éléments métalliques. | | Électrode sélective d’ion (ISE) | capteur qui développe un potentiel électrique en fonction de l’activité d’un ion spécifique dans une solution. | | Équation de Nernst | relation entre le potentiel d’une électrode et l’activité de l’espèce chimique qu’elle détecte. | | Pente de l’électrode | variation du potentiel par décade d’activité d’ion ; valeur théorique à 25 °C pour un ion monovalent = 59,16 mV·dec⁻¹. | | Blanc | solution contenant uniquement le solvant et les réactifs, utilisée pour mettre à zéro l’instrument avant mesure. | | Étalonnage | procédure consistant à mesurer des échantillons de concentration connue pour établir une relation entre signal et concentration. | | Warm‑up | période de stabilisation d’une lampe ou d’une source de chaleur avant de commencer les mesures analytiques. | --- ## Exercices d'application corrigés ### Exercice 1 – Contrôle de qualité d’un réactif de glucose Un lot de réactif pour le dosage du glucose par la méthode glucose‑oxydase présente une étiquette indiquant 100 mg·dL⁻¹. Après préparation d’un témoin à cette concentration, la mesure au spectrophotomètre (λ = 505 nm) donne une absorbance de 0,210. L’étalonnage préalable a fourni la relation : \[ A = 0,0021\,C \quad (C \text{ en mg·dL}^{-1}) \] **Questions** : 1. Calculer la concentration mesurée du témoin. 2. Déterminer l’erreur relative par rapport à la valeur nominale. 3. Décider si le lot est accepté (seuil d’acceptation : ± 5 %). **Corrigé** : 1. \(C = \frac{A}{0,0021}= \frac{0,210}{0,0021}=100\; \text{mg·dL}^{-1}\). 2. Erreur relative = \(\frac{|100-100|}{100}\times100 = 0\%\). 3. Comme l’erreur est nulle (< 5 %), le lot est accepté. --- ### Exercice 2 – Dosage du potassium sérique par photomètre de flamme Un technicien prépare les étalons suivants de K⁺ (en mmol·L⁻¹) et mesure les intensités correspondantes (unités arbitraires) : | [K⁺] (mmol·L⁻¹) | Intensité | |----------------|-----------| | 0 | 0 | | 2 | 115 | | 4 | 230 | | 6 | 345 | | 8 | 460 | Le sérum du patient donne une intensité de 275 unités. **Questions** : 1. Déterminer l’équation de droit qui relie intensité et concentration. 2. Calculer la concentration de potassium du sérum. 3. Si la norme physiologique est 3,5‑5,0 mmol·L⁻¹, interpréter le résultat. **Corrigé** : 1. Les points sont parfaitement linéaires : pente = \(115/2 = 57,5\) unités·mmol⁻¹·L. L’équation est \(I = 57,5\,C\). 2. \(C = \frac{I}{57,5}= \frac{275}{57,5}=4,78\; \text{mmol·L}^{-1}\). 3. La valeur 4,78 mmol·L⁻¹ se situe dans l’intervalle de référence (3,5‑5,0) ; le résultat est considéré comme normal. --- ### Exercice 3 – Mesure du sodium sérique avec un ionomètre Deux tampons de Na⁺ sont préparés : - Tampon A : 0,1 mmol·L⁻¹ → potentiel mesuré \(E_A = -130,2\) mV. - Tampon B : 100 mmol·L⁻¹ → potentiel mesuré \(E_B = +28,4\) mV. Un échantillon de sérum donne un potentiel \(E_{mes}= -24,5\) mV. **Questions** : 1. Calculer la pente de l’électrode (en mV·dec⁻¹). 2. Déterminer le potentiel standard \(E^{0}\) (en supposant qu’il corresponde au potentiel du tampon A). 3. Calculer l’activité du Na⁺ dans le sérum puis la concentration en supposant un coefficient d’activité de 0,75. **Corrigé** : 1. Pente = \(\dfrac{E_B - E_A}{\log_{10}(100) - \log_{10}(0,1)} = \dfrac{28,4 - (-130,2)}{2 - (-1)} = \dfrac{158,6}{3}=52,87\; \text{mV·dec}^{-1}\). 2. On prend \(E^{0}=E_A = -130,2\) mV. 3. \(\log a_{Na^+}= \dfrac{E_{mes}-E^{0}}{\text{pente}} = \dfrac{-24,5 - (-130,2)}{52,87}= \dfrac{105,7}{52,87}=2,000\). \(a_{Na^+}=10^{2,000}=100\; \text{mmol·L}^{-1}\). Concentration réelle = \(\dfrac{a}{\gamma}= \dfrac{100}{0,75}=133,3\; \text{mmol·L}^{-1}\). Cette valeur est cohérente avec l’intervalle de référence natrémique (135‑145 mmol·L⁻¹) après prise en compte du facteur d’activité (≈ 0,75) → concentration réelle ≈ 133 mmol·L⁻¹. --- ## Erreurs fréquentes et règles de sécurité | N° | Situation fréquente | Conséquence | Règle de prévention / action corrective | |----|---------------------|-------------|----------------------------------------| | 1 | Utilisation d’une lampe de spectrophotomètre dépassant 1500 h sans remplacement | Drift de l’absorbance, résultats systématiquement biaisés | Remplacer la lampe selon les préconisations du fabricant (souvent après 1000‑1500 h) et réaliser un warm‑up de 15 min avant chaque série. | | 2 | Cuvette en verre utilisée pour des mesures UV (< 340 nm) | Absorption du verre, sous‑estimation de l’absorbance | Utiliser exclusivement des cuvettes en quartz pour le domaine UV ; vérifier la transmission du matériau avant chaque utilisation. | | 3 | Flamme du photomètre trop riche en acétylène (flamme jaune) | Formation de suie sur l’électrode d’émission, signal instable | Ajuster le débit d’air et de gaz pour obtenir une flamme bleue claire ; nettoyer la buse hebdomadairement. | | 4 | Électrode d’ionomètre laissée à l’air libre pendant plus de 30 min | Déshydratation de la membrane, dérives de pente | Toujours stocker l’électrode dans sa solution de remplissage (souvent du KCl saturé) ; rincer à l’eau distillée après chaque mesure. | | 5 | Oubli du blanc avant l’étalonnage du spectrophotomètre | Erreur systématique sur toutes les mesures (offset) | Faire systématiquement une mesure du blanc et mettre à zéro l’instrument avant chaque étalonnage. | | 6 | Manipulation de réactifs contenant du cyanure sans gants nitrile | Risque d’irritation cutanée et d’inhalation de vapeurs toxiques | Porter des gants nitrile, des lunettes de protection et travailler sous hotte lorsqu’on manipule des réactifs cyanurés. | > **>** Toute mesure présentant un écart supérieur à 2 × l’écart‑type du blanc doit déclencher une vérification immédiate de la lampe, de la cuve et du blanc avant de poursuivre l’analyse. > **>** Le remplacement périodique de la lampe du spectrophotomètre (tous les 1000‑1500 h) et le contrôle mensuel de sa stabilité sont des exigences de la norme ISO 15189 pour les laboratoires de biologie médicale. > **>** En photométrie de flamme, la présence de suie indique un mauvais mélange air‑gaz ; corriger le débit avant toute mesure sous peine de résultats non reproductibles. > **>** Les électrodes d’ionomètre doivent être rincées à l’eau distillée et stockées dans leur solution de remplissage après chaque utilisation afin d’éviter la dégradation de la membrane. --- *Fin du cours.*