Applications des enzymes (partie 2/2)

# Chapitre : Applications des enzymes (partie 2/2) ## Objectifs et prérequis **À la fin de ce chapitre, l’élève sera capable de :** - Définir et distinguer une inhibition **incompétitive** d’une inhibition **mixte** au niveau du mécanisme enzymatique. - Écrire les équations de vitesse modifiées pour chaque type d’inhibition et en déduire les expressions de \(K_m^{app}\) et \(V_{max}^{app}\). - Interpréter graphiquement les résultats obtenus avec les diagrammes de Lineweaver‑Burk, Eadie‑Hofstee et Hanes‑Woolf. - Réaliser un calcul numérique permettant de déterminer la constante d’inhibition \(K_i\) à partir de données expérimentales. - Citer des exemples professionnels d’inhibitions incompétitives et mixtes rencontrés en industrie agroalimentaire, pharmaceutique ou environnementale au Cameroun. - Appliquer les règles de sécurité et d’hygiène liées à la manipulation d’enzymes et d’inhibiteurs en laboratoire ou en atelier. **Prérequis :** - Maîtrise de la cinétique enzymatique de Michaelis‑Menten (équation \(v = \dfrac{V_{max}[S]}{K_m + [S]}\)). - Connaissance des inhibitions compétitives et non compétitives (Leçon 6‑7). - Notions de base sur les diagrammes de réciproques (Lineweaver‑Burk) et les unités utilisées en enzymologie (mol·L⁻¹, s⁻¹, U·mL⁻¹). --- ## Introduction contextualisée Dans les procédés industriels camerounais (transformation du cacao, production de jus de fruits, fabrication de détergents enzymatiques), les enzymes sont souvent exposées à des molécules qui modifient leur activité. Selon le site de liaison de l’inhibiteur par rapport au site actif, on observe différents types d’inhibition. Après avoir étudié les inhibitions compétitives et non compétitives, nous abordons ici deux cas moins fréquents mais d’une grande importance pratique : l’inhibition **incompétitive** (l’inhibiteur ne se lie qu’au complexe enzyme‑substrat) et l’inhibition **mixte** (l’inhibiteur peut se lier à l’enzyme libre ou au complexe enzyme‑substrat, avec des affinités différentes). Comprendre ces mécanismes permet d’optimiser les rendements de réaction, de concevoir des inhibiteurs thérapeutiques sélectifs et de mettre en place des contrôles de qualité conformes aux normes du MINESUP et de l’IGE. --- ## I. Leçon 8 : Les inhibitions incompétitives ### 1. Définition et schéma réactionnel > **Définition** : Une inhibition est dite *incompétitive* lorsque l’inhibiteur \(I\) ne se lie qu’au complexe enzyme‑substrat \(ES\), formant un ternaire \(ESI\) qui est catalytiquement inactif. Le schéma réactionnel s’écrit : \[ E + S \underset{k_{-1}}{\overset{k_1}{\rightleftharpoons}} ES \xrightarrow{k_{cat}} E + P \] \[ ES + I \underset{k_{-i}}{\overset{k_i}{\rightleftharpoons}} ESI \quad (\text{inactif}) \] > **Propriété clé** : L’inhibiteur ne modifie pas l’affinité de l’enzyme pour le substrat (\(K_m\) reste inchangé) mais diminue la vitesse maximale (\(V_{max}\) diminue). ### 2. Équation de vitesse modifiée En appliquant l’état stationnaire au complexe \(ES\) et en tenant compte de l’équilibre \(ESI\), on obtient : \[ v = \frac{V_{max}[S]}{K_m + [S]\left(1 + \frac{[I]}{K_i}\right)} \] où \(K_i = \dfrac{k_{-i}}{k_i}\) est la constante d’inhibition du complexe \(ESI\). > **Formule à retenir** : > \[ > V_{max}^{app} = \frac{V_{max}}{1 + \frac{[I]}{K_i}}, \qquad K_m^{app} = K_m > \] ### 3. Représentation graphique > **Représentation graphique** > - **Lineweaver‑Burk** (\(\dfrac{1}{v}\) vs \(\dfrac{1}{[S]}\)) : les droites pour différentes \([I]\) sont **parallèles** (même pente \(\dfrac{K_m}{V_{max}}\)) mais interceptent l’axe des ordonnées à des valeurs différentes \(\dfrac{1}{V_{max}^{app}}\). > - **Eadie‑Hofstee** (\(v\) vs \(v/[S]\)) : les droites sont **parallèles** (même pente \(-K_m\)) mais ont des ordonnées à l’origine différentes \(V_{max}^{app}\) (qui diminue avec \([I]\)). > - **Hanes‑Woolf** (\(\dfrac{[S]}{v}\) vs \([S]\)) : les droites ont **la même ordonnée à l’origine** (\(\dfrac{K_m}{V_{max}}\), inchangée) mais des pentes différentes (pente = \(\dfrac{1}{V_{max}^{app}} = \dfrac{1}{V_{max}}\left(1+\dfrac{[I]}{K_i}\right)\)). > > > **Règle d’interprétation** : Des droites parallèles en Lineweaver‑Burk signalent une inhibition incompétitive. ### 4. Exemple professionnel et calcul numérique **Contexte** : Dans une unité de traitement des eaux usées à Yaoundé, l’enzyme *uréase* (hydrolyse de l’urée en ammoniac) est inhibée par un composé phosphorique présent dans certains détergents. On mesure les vitesses initiales à différentes concentrations d’urée \([S]\) avec et sans inhibiteur \([I] = 0,5\ \text{mM}\). | \([S]\) (mM) | \(v\) sans I (µmol·min⁻¹·mL⁻¹) | \(v\) avec I (µmol·min⁻¹·mL⁻¹) | |--------------|--------------------------------|--------------------------------| | 0,5 | 0,42 | 0,28 | | 1,0 | 0,71 | 0,48 | | 2,0 | 1,05 | 0,73 | | 5,0 | 1,48 | 1,04 | | 10,0 | 1,70 | 1,20 | **Étape 1** : Tracer \(1/v\) en fonction de \(1/[S]\) pour les deux séries. On obtient deux droites parallèles. **Étape 2** : Déterminer la pente commune : \(\dfrac{K_m}{V_{max}} = 0,85\ \text{mM·min·µmol}^{-1}\). **Étape 3** : L’ordonnée à l’origine sans I donne \(\dfrac{1}{V_{max}} = 0,30\ \text{min·µmol}^{-1}\) → \(V_{max}=3,33\ \text{µmol·min}^{-1}\text{·mL}^{-1}\). **Étape 4** : Avec I, l’ordonnée à l’origine vaut \(\dfrac{1}{V_{max}^{app}} = 0,45\ \text{min·µmol}^{-1}\) → \(V_{max}^{app}=2,22\ \text{µmol·min}^{-1}\text{·mL}^{-1}\). **Étape 5** : Calculer \(K_i\) à partir de la relation \(V_{max}^{app}=V_{max}/\left(1+[I]/K_i\right)\) : \[ 2,22 = \frac{3,33}{1 + \frac{0,5}{K_i}} \;\Longrightarrow\; 1 + \frac{0,5}{K_i}= \frac{3,33}{2,22}=1,5 \] \[ \frac{0,5}{K_i}=0,5 \;\Longrightarrow\; K_i = 1,0\ \text{mM} \] > **Résultat** : La constante d’inhibition de l’uréase par le composé phosphorique est \(K_i = 1,0\ \text{mM}\). ### 5. Applications et précautions - **Industrie agroalimentaire** : Inhibition incompétitive de la *pectinase* par certains polyphénols permet de contrôler la clarification des jus de fruits. - **Pharmacie** : Certains inhibiteurs de l’acétylcholinesterase agissent de façon incompétitive, utile pour prolonger l’action des médicaments anti‑myasthéniques. - **Sécurité** : Manipuler les inhibiteurs phosphorés avec des gants nitrile et travailler sous hotte ; ils peuvent être irritants et potentiellement neurotoxiques. --- ## II. Leçon 9 : Les inhibitions mixtes ### 1. Définition et schéma réactionnel > **Définition** : Une inhibition est dite *mixte* lorsque l’inhibiteur \(I\) peut se lier à l’enzyme libre \(E\) (avec constante \(K_i\)) **et** au complexe enzyme‑substrat \(ES\) (avec constante \(K_i'\)), modifiant ainsi à la fois l’affinité pour le substrat et la vitesse maximale. Schéma : \[ E + S \underset{k_{-1}}{\overset{k_1}{\rightleftharpoons}} ES \xrightarrow{k_{cat}} E + P \] \[ E + I \underset{k_{-i}}{\overset{k_i}{\rightleftharpoons}} EI \quad (\text{inactif}) \] \[ ES + I \underset{k_{-i}'}{\overset{k_i'}{\rightleftharpoons}} ESI \quad (\text{inactif}) \] > **Propriété clé** : Selon les valeurs de \(K_i\) et \(K_i'\), l’inhibition peut apparaître compétitive (\(K_i' \gg K_i\)), non compétitive (\(K_i = K_i'\)) ou incompétitive (\(K_i \gg K_i'\)). ### 2. Équation de vitesse modifiée En appliquant l’état stationnaire et en considérant les deux équilibres d’inhibition, on obtient : \[ v = \frac{V_{max}[S]}{K_m\left(1 + \frac{[I]}{K_i}\right) + [S]\left(1 + \frac{[I]}{K_i'}\right)} \] > **Formules à retenir** : \[ V_{max}^{app} = \frac{V_{max}}{1 + \frac{[I]}{K_i'}}, \qquad K_m^{app} = K_m\,\frac{1 + \frac{[I]}{K_i}}{1 + \frac{[I]}{K_i'}} \] ### 3. Représentation graphique > **Représentation graphique** > - **Lineweaver‑Burk** (\(\dfrac{1}{v}\) vs \(\dfrac{1}{[S]}\)) : Les droites pour différentes \([I]\) se coupent **à gauche de l’axe des ordonnées** (intercept sur l’axe des abscisses négatif) lorsque \(K_i \neq K_i'\). > * Si l’intercept sur l’axe des abscisses est négatif et l’ordonnée à l’origine augmente avec \([I]\) → inhibition mixte. > * Si les droites se coupent sur l’axe des ordonnées → inhibition non compétitive (\(K_i = K_i'\)). > * Si elles sont parallèles → inhibition incompétitive (cas particulier). > - **Eadie‑Hofstee** (\(v\) vs \(v/[S]\)) : Les droites présentent des pentes différentes (\(-K_m^{app}\)) et des ordonnées à l’origine différentes (\(V_{max}^{app}\)); elles se coupent en un point qui n’est pas sur un axe (généralement à gauche de l’axe des ordonnées) lorsque \(K_i \neq K_i'\). > - **Hanes‑Woolf** (\(\dfrac{[S]}{v}\) vs \([S]\)) : Les droites présentent des pentes différentes (\(\dfrac{1}{V_{max}^{app}}\)) et des interceptes différents (\(\dfrac{K_m^{app}}{V_{max}^{app}}\)); elles se coupent à gauche de l’axe des ordonnées (intercept sur l’axe des abscisses négatif) lorsque \(K_i \neq K_i'\). > > > **Règle d’interprétation** : Un déplacement parallèle de l’intercept sur l’axe des abscisses indique une modification de \(K_m^{app}\) ; un changement de l’ordonnée à l’origine indique une modification de \(V_{max}^{app}\). ### 4. Exemple professionnel et calcul numérique **Contexte** : Dans une brasserie artisanale à Douala, l’enzyme *α‑amylase* (hydrolyse de l’amidon) est exposée à un extrait de tanin provenant du bois de chauffage utilisé pour le séchage du malt. On mesure les vitesses à différentes concentrations de maltose \([S]\) avec et sans extrait de tanin \([I] = 1,0\ \text{mM}\). | \([S]\) (mM) | \(v\) sans I (µmol·min⁻¹·mL⁻¹) | \(v\) avec I (µmol·min⁻¹·mL⁻¹) | |--------------|--------------------------------|--------------------------------| | 0,2 | 0,18 | 0,12 | | 0,5 | 0,42 | 0,28 | | 1,0 | 0,71 | 0,48 | | 2,0 | 1,05 | 0,73 | | 5,0 | 1,48 | 1,04 | | 10,0 | 1,70 | 1,20 | **Étape 1** : Tracer les droites Lineweaver‑Burk. On observe une intersection située à gauche de l’axe des ordonnées (intercept sur l’axe des abscisses négatif). **Étape 2** : Déterminer les paramètres à partir des intercepts. - Sans I : pente = \(K_m/V_{max}=0,85\ \text{mM·min·µmol}^{-1}\), ordonnée à l’origine = \(1/V_{max}=0,30\ \text{min·µmol}^{-1}\) → \(V_{max}=3,33\ \text{µmol·min}^{-1}\text{·mL}^{-1}\), \(K_m = \text{pente} \times V_{max}=0,85 \times 3,33 = 2,83\ \text{mM}\). - Avec I : pente = \(1,10\ \text{mM·min·µmol}^{-1}\), ordonnée à l’origine = \(0,45\ \text{min·µmol}^{-1}\) → \(V_{max}^{app}=1/0,45=2,22\ \text{µmol·min}^{-1}\text{·mL}^{-1}\), \(K_m^{app}= \text{pente} \times V_{max}^{app}=1,10 \times 2,22 = 2,44\ \text{mM}\). **Étape 3** : Calculer \(K_i'\) à partir de \(V_{max}^{app}\) : \[ V_{max}^{app}= \frac{V_{max}}{1+\frac{[I]}{K_i'}} \Longrightarrow 2,22 = \frac{3,33}{1+\frac{1,0}{K_i'}} \] \[ 1+\frac{1,0}{K_i'} = \frac{3,33}{2,22}=1,5 \Longrightarrow \frac{1,0}{K_i'}=0,5 \Longrightarrow K_i' = 2,0\ \text{mM} \] **Étape 4** : Calculer \(K_i\) à partir de \(K_m^{app}\) : \[ K_m^{app}= K_m\frac{1+\frac{[I]}{K_i}}{1+\frac{[I]}{K_i'}} \Longrightarrow 2,44 = 2,83 \frac{1+\frac{1,0}{K_i}}{1+\frac{1,0}{2,0}} \] \[ \frac{1+\frac{1,0}{K_i}}{1+0,5}= \frac{2,44}{2,83}=0,8625 \] \[ 1+\frac{1,0}{K_i}=0,8625 \times 1,5 = 1,2938 \Longrightarrow \frac{1,0}{K_i}=0,2938 \Longrightarrow K_i \approx 3,4\ \text{mM} \] > **Résultat** : L’extrait de tanin inhibe l’α‑amylase de façon mixte avec \(K_i \approx 3,4\ \text{mM}\) (liaison préférentielle à l’enzyme libre) et \(K_i' = 2,0\ \text{mM}\) (liaison plus faible au complexe ES). ### 5. Applications et précautions - **Industrie brassicole** : Les tanins peuvent modérer l’activité de l’α‑amylase, permettant un meilleur contrôle du profil de sucre du moût. - **Agro‑alimentaire** : Inhibition mixte de la *lipase* par certains acides gras libres sert à réguler la rancidité des huiles végétales. - **Sécurité** : Les polyphénols (tanins) peuvent former des complexes avec les protéines ; manipuler avec des lunettes de protection et éviter l’inhalation de poussières. --- ## Synthèse du chapitre - **Inhibition incompétitive** : liaison exclusive au complexe \(ES\); \(V_{max}\) diminue, \(K_m\) inchangé; droites Lineweaver‑Burk parallèles. - **Inhibition mixte** : liaison à \(E\) et à \(ES\) avec constantes \(K_i\) et \(K_i'\); \(V_{max}\) et \(K_m\) tous deux modifiés; droites Lineweaver‑Burk se coupant à gauche de l’axe des ordonnées. - **Formules clés** : \[ v_{\text{incomp}} = \frac{V_{max}[S]}{K_m + [S]\left(1+\frac{[I]}{K_i}\right)} \] \[ v_{\text{mixte}} = \frac{V_{max}[S]}{K_m\left(1+\frac{[I]}{K_i}\right)+[S]\left(1+\frac{[I]}{K_i'}\right)} \] - **Interprétation graphique** : - Incompétitive → parallèles (même pente). - Mixte → intersection à gauche de l’axe des abscisses (modification de \(K_m^{app}\) et \(V_{max}^{app}\)). - **Exemples professionnels** : uréase inhibée par un composé phosphorique (incompétitive) ; α‑amylase inhibée par des tanins (mixte). - **Précautions** : port de gants nitrile, lunettes de protection, travail sous hotte pour les inhibiteurs chimiques potentiellement irritants ou neurotoxiques. --- ## Glossaire | Terme | Définition | |-------|------------| | Inhibition incompétitive | Type d’inhibition où l’inhibiteur ne se lie qu’au complexe enzyme‑substrat, diminuant \(V_{max}\) sans affecter \(K_m\). | | Inhibition mixte | Inhibition où l’inhibiteur peut se lier à l’enzyme libre et au complexe enzyme‑substrat, modifiant à la fois \(K_m\) et \(V_{max}\). | | \(K_i\) | Constante d’inhibition décrivant l’affinité de l’inhibiteur pour l’enzyme libre (ou pour le complexe ES selon le contexte). | | \(K_i'\) | Constante d’inhibition décrivant l’affinité de l’inhibiteur pour le complexe enzyme‑substrat (dans le cas d’une inhibition mixte). | | \(V_{max}^{app}\) | Vitesse maximale apparente en présence d’un inhibiteur. | | \(K_m^{app}\) | Constante de Michaelis apparente en présence d’un inhibiteur. | | Diagramme de Lineweaver‑Burk | Représentation de \(\dfrac{1}{v}\) en fonction de \(\dfrac{1}{[S]}\) utilisée pour distinguer les types d’inhibition. | | Diagramme d’Eadie‑Hofstee | Représentation de \(v\) en fonction de \(v/[S]\); utile pour visualiser les changements de \(V_{max}\) et \(K_m\). | | Diagramme de Hanes‑Woolf | Représentation de \(\dfrac{[S]}{v}\) en fonction de \([S]\); moins sensible aux erreurs de mesure aux faibles \([S]\). | | Enzyme ternaire | Complexe formé par l’enzyme, le substrat et l’inhibiteur (ex. \(ESI\)). | | État stationnaire | Hypothèse selon laquelle la concentration du complexe enzyme‑substrat reste constante durant la réaction initiale. | | Constante de Michaelis (\(K_m\)) | Concentration de substrat pour laquelle la vitesse réactionnelle vaut la moitié de \(V_{max}\). | | Vitesse maximale (\(V_{max}\)) | Vitesse réactionnelle atteinte lorsque l’enzyme est saturée par le substrat. | | Inhibiteur | Molécule qui diminue l’activité catalytique d’une enzyme. | | Substrat | Molécule sur laquelle l’enzyme agit pour produire un produit. | --- ## Exercices d'application corrigés ### Exercice 1 – Inhibition incompétitive (industrie laitière) Une laiterie de Bafoussam utilise la *lactase* pour hydrolyser le lactose du lait. Un résidu de désinfectant à base de quaternaire d’ammonium inhibe la lactase de façon incompétitive. À \([I]=0,8\ \text{mM}\), on mesure les vitesses suivantes : | \([S]\) (mM) | \(v\) (µmol·min⁻¹·mL⁻¹) | |--------------|--------------------------| | 0,5 | 0,35 | | 1,0 | 0,60 | | 2,0 | 0,95 | | 5,0 | 1,30 | | 10,0 | 1,45 | **1.** Déterminer \(V_{max}\) et \(K_m\) en absence d’inhibiteur (on sait que sans I, \(V_{max}=2,0\ \text{µmol·min}^{-1}\text{·mL}^{-1}\) et \(K_m=1,2\ \text{mM}\)). **2.** Calculer la constante d’inhibition \(K_i\). **Corrigé** 1. Les valeurs données sont déjà celles de l’enzyme pure : \(V_{max}=2,0\), \(K_m=1,2\ \text{mM}\). 2. En présence d’inhibiteur, on utilise l’équation de l’inhibition incompétitive : \[ v = \frac{V_{max}[S]}{K_m + [S]\left(1+\frac{[I]}{K_i}\right)} \] On peut linéariser sous la forme de Lineweaver‑Burk : \[ \frac{1}{v}= \frac{K_m}{V_{max}}\frac{1}{[S]} + \frac{1}{V_{max}}\left(1+\frac{[I]}{K_i}\right) \] À partir des données, on trace \(1/v\) vs \(1/[S]\). La pente (mesurée expérimentalement) vaut \(0,60\ \text{mM·min·µmol}^{-1}\) (égale à \(K_m/V_{max}\) car l’inhibiteur ne change pas la pente). L’ordonnée à l’origine avec I vaut \(0,70\ \text{min·µmol}^{-1}\). Sans I, l’ordonnée à l’origine serait \(1/V_{max}=0,5\ \text{min·µmol}^{-1}\). Ainsi : \[ \frac{1}{V_{max}^{app}} = \frac{1}{V_{max}}\left(1+\frac{[I]}{K_i}\right) \Longrightarrow 0,70 = 0,5\left(1+\frac{0,8}{K_i}\right) \] \[ 1+\frac{0,8}{K_i}= \frac{0,70}{0,5}=1,4 \Longrightarrow \frac{0,8}{K_i}=0,4 \Longrightarrow K_i = \frac{0,8}{0,4}=2,0\ \text{mM} \] **Réponse** : \(K_i = 2,0\ \text{mM}\). --- ### Exercice 2 – Inhibition mixte (industrie brassicole) Dans une brasserie de Garoua, l’extrait de tanin inhibe l’α‑amylase de façon mixte. On obtient les paramètres suivants à partir du tracé Lineweaver‑Burk : - Sans inhibiteur : pente = \(0,90\ \text{mM·min·µmol}^{-1}\), ordonnée à l’origine = \(0,25\ \text{min·µmol}^{-1}\). - Avec \([I]=1,5\ \text{mM}\) : pente = \(1,20\ \text{mM·min·µmol}^{-1}\), ordonnée à l’origine = \(0,40\ \text{min·µmol}^{-1}\). **1.** Calculer \(V_{max}\), \(K_m\) en absence d’inhibiteur. **2.** Déterminer les constantes d’inhibition \(K_i\) et \(K_i'\). **Corrigé** 1. \(V_{max}=1/0,25 = 4,0\ \text{µmol·min}^{-1}\text{·mL}^{-1}\). \(K_m = \text{pente} \times V_{max}=0,90 \times 4,0 = 3,6\ \text{mM}\). 2. Avec inhibiteur : \[ V_{max}^{app}= \frac{1}{0,40}=2,5\ \text{µmol·min}^{-1}\text{·mL}^{-1} \] \[ K_m^{app}= \text{pente} \times V_{max}^{app}=1,20 \times 2,5 = 3,0\ \text{mM} \] Relations : \[ V_{max}^{app}= \frac{V_{max}}{1+\frac{[I]}{K_i'}} \Longrightarrow 2,5 = \frac{4,0}{1+\frac{1,5}{K_i'}} \] \[ 1+\frac{1,5}{K_i'} = \frac{4,0}{2,5}=1,6 \Longrightarrow \frac{1,5}{K_i'}=0,6 \Longrightarrow K_i' = \frac{1,5}{0,6}=2,5\ \text{mM} \] \[ K_m^{app}= K_m\frac{1+\frac{[I]}{K_i}}{1+\frac{[I]}{K_i'}} \Longrightarrow 3,0 = 3,6 \frac{1+\frac{1,5}{K_i}}{1+\frac{1,5}{2,5}} \] \[ 1+\frac{1,5}{K_i}= \frac{3,0}{3,6}\left(1+\frac{1,5}{2,5}\right)=0,8333 \times (1+0,6)=0,8333 \times 1,6 =1,3333 \] \[ \frac{1,5}{K_i}=1,3333-1=0,3333 \Longrightarrow K_i = \frac{1,5}{0,3333}=4,5\ \text{mM} \] **Réponse** : \(K_i = 4,5\ \text{mM}\) (liaison préférentielle à l’enzyme libre) ; \(K_i' = 2,5\ \text{mM}\) (liaison au complexe ES). --- ## Erreurs fréquentes et règles de sécurité | N° | Erreur fréquente | Conséquence | Règle de prévention / bonne pratique | |----|------------------|-------------|--------------------------------------| | 1 | Confondre l’ordonnée à l’origine et la pente dans un diagramme de Lineweaver‑Burk lorsqu’on détermine \(V_{max}^{app}\) et \(K_m^{app}\). | Valeurs erronées de \(K_i\) ou \(K_i'\). | Toujours rappeler que la pente = \(K_m^{app}/V_{max}^{app}\) et l’ordonnée à l’origine = \(1/V_{max}^{app}\). Vérifier les unités avant de calculer. | | 2 | Oublier de convertir les concentrations en la même unité (ex. mM vs µM) avant d’insérer dans les équations. | Erreurs de facteur 10³ sur les constantes d’inhibition. | Utiliser un tableau de conversion systématique ; noter les unités à chaque étape du calcul. | | 3 | Supposer qu’une inhibition mixte se manifeste toujours par des droites se coupant sur l’axe des ordonnées (comme une inhibition non compétitive). | Mauvaise identification du type d’inhibition. | Rappeler que seules les droites parallèles indiquent une inhibition incompétitive ; une intersection à gauche de l’axe des abscisses signale une inhibition mixte (ou compétitive si l’intercept est à droite). | | 4 | Manipuler des inhibiteurs phosphorés ou des tanins sans protection respiratoire. | Risque d’irritation des voies respiratoires, de sensibilisation cutanée. | Travailler sous hotte aspirante, porter des gants nitrile, des lunettes de protection et, si nécessaire, un masque à filtre P2. | | 5 | Négliger l’effet de la température sur \(K_m\) et \(V_{max}\) lors de la comparaison d’essais réalisés à des températures différentes. | Interprétation erronée de l’effet de l’inhibiteur. | Effectuer tous les essais à la même température (souvent 25 °C ou 37 °C selon le protocole) ou appliquer les corrections de Arrhenius si nécessaire. | | 6 | Utiliser un volume de réaction trop faible, entraînant des erreurs de pipetage importantes sur les faibles concentrations de substrat. | Grande variabilité des vitesses initiales, mauvaise ajustement des courbes. | Respecter un volume minimal de 200 µL pour les essais enzymatiques ; vérifier la précision des micropipettes (calibration mensuelle). | --- *Fin du cours.*